我最近尝试使用breseq
来分析一些细菌测序数据。然而,当breseq
使用bowtie2
将原始数据与参考基因组比对时,我遇到了一个致命的错误。
以下是我得到的错误的关键部分:+++ NOW PROCESSING Read alignment to reference genome
[system] bowtie2-build -q test_breseq/data/reference.fasta test_breseq/02_reference_alignment/reference
[system] bowtie2 -t -p 4 --local -L 31 --ma 1 --mp 3 --np 0 --rdg 2,3 --rfg 2,3 --ignore-quals -k 2000 -i S,1,0.25 --score-min L,0,0.9 --reorder -x test_breseq/02_reference_alignment/reference -U test_breseq/01_sequence_conversion/MRSA_10C.1.converted.fastq -S test_breseq/02_reference_alignment/MRSA_10C.1.stage1.sam --un test_breseq/02_reference_alignment/MRSA_10C.1.stage1.unmatched.fastq
Error: the match penalty is greater than 0 (1) but the --score-min function can be less than or equal to zero. Either let the match penalty be 0 or make --score-min always positive.
Error: Encountered internal Bowtie 2 exception (#1)
Command: /usr/bin/bowtie2-align-s --wrapper basic-0 -t -p 4 --local -L 31 --ma 1 --mp 3 --np 0 --rdg 2,3 --rfg 2,3 --ignore-quals -k 2000 -i S,1,0.25 --score-min L,0,0.9 --reorder -x test_breseq/02_reference_alignment/reference --passthrough -U test_breseq/01_sequence_conversion/MRSA_10C.1.converted.fastq
(ERR): bowtie2-align exited with value 1
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!> FATAL ERROR <!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
Error running command:
[system] bowtie2 -t -p 4 --local -L 31 --ma 1 --mp 3 --np 0 --rdg 2,3 --rfg 2,3 --ignore-quals -k 2000 -i S,1,0.25 --score-min L,0,0.9 --reorder -x test_breseq/02_reference_alignment/reference -U test_breseq/01_sequence_conversion/MRSA_10C.1.converted.fastq -S test_breseq/02_reference_alignment/MRSA_10C.1.stage1.sam --un test_breseq/02_reference_alignment/MRSA_10C.1.stage1.unmatched.fastq
Result code: 256
FILE: libbreseq/common.h LINE: 1384
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
运行bowtie2
(samtools
,转换FASTQ)之前的所有步骤都正常工作。根据误差,这是因为分数最小函数,该函数的最小分数为0(--score-min L,0,0.9
)。当我将函数更改为--score-min L,0.1,0.9
(0被0.1替换)时,bowtie2
的命令单独起作用。但看起来这部分是在breseq
中编码的(不是吗?)。
关于我的问题的更多详细信息:
-运行breseq
的命令是:breseq -o OUTPUT_DIR -j 4 -r REFERENCE.fastq RAWDATA.1.FASTQ.GZ RAWDATA.2.FASTQ.GZ
-原始数据类型:MiSeq(150x2)
-bowtie2
的版本:2.3.0breseq
的版本:0.29.0
-OS:Linux 16.04 LTS
--测试也得到了类似的错误。
这是个错误还是我用错了?如有任何意见或建议,我将不胜感激。
breseq的下一个版本将更新其选项,以与新的bowtie2兼容。我应该在一两周后发布这个。如果你想从GitHub存储库中构建并使用bowtie 2.3.0,那么这段代码已经被签入了GitHub。或者,您可以暂时将bowtie2的2.2.9版本与当前版本的breseq一起使用。